Quantifizierung von Nukleinsäuren
Um den Gehalt von Nukleinsäuren in einer Lösung zu bestimmen, wird der Absorptionswert der Lösung bei 260 nm (A260) verwendet. Folgende, aus dem Lambert-Beerschen Gesetz abgeleitete Berechnung, kommt zur Anwendung:
Konzentration [ng/µl] = Absorption (260 nm) x Faktor
(wobei Faktor = Probenspezifischer Faktor x Virtueller Verdünnungsfaktor)
Der probenspezifische Faktor repräsentiert die spezifische Absorption, bei der beispielsweise eine Probe mit 50 ng/µl dsDNA einen Absorptionswert von 1 Abs (A260) aufweist, gemessen mit einer Schichtdicke von 10 mm in einer herkommlichen Küvette. Aufgrund der zur Auswahl stehenden Schichtdicken von 0,2 mm und 1 mm bei der TrayCell muss daher zusatzlich der virtuelle Verdünnungsfaktor (50 bzw. 10) berücksichtigt werden.
Fur die unterschiedlichen Nukleinsäure-Arten ergibt sich der mittlere dynamische Bereich der Konzentration (ng/µl) in Abhängigkeit von der optischen Schichtdicke wie folgt:
| 1 mm Deckel (Virtueller Verdünnungs- faktor 10) [ng/µl] * | 0,2 mm Deckel (Virtueller Verdünnungs- faktor 50) [ng/µl] * | Gesamt- mess- bereich [ng/µl] * | |
| dsDNA | 13 – 850 | 63 – 4250 | 6 – 8500 |
| ssDNA | 9 – 629 | 46 – 3145 | 5 – 6290 |
| ssRNA | 10 – 680 | 50 – 3400 | 5 – 6800 |
| Oligo | 8 – 561 | 41 – 2805 | 4 – 5610 |
| * typische, mit einem durchschnittlichen Photometer messbare Konzentrationswerte | |||
